PCR에 관하여
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작성일 23-01-13 16:05
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중합 효소 연쇄 반응(PCR)에 관한 자료(data)입니다. DNA의 양쪽 가닥을 주형으로 DNA를 선택적으로 증폭시키는 방법으로 DNA 복제에 있어서 꼭 필요한 방법이다.
일반적으로 PCR 과정은 크게 Predenaturation후 DNA denaturation, primer의 annealing, extension 의 세과정을 반복한 다음 end filling 을 거쳐 4℃에서 보존하게 된다
1. Predenaturation : 94℃에서 3분간 진행.
2. DNA denaturation : 94℃에서 15초에서 1분간을 표준으로 하지만 30초로도 충분. 너무 길면 DNA polymerase에 이상이 생길 수 있음.
3. Primer Annealing : 제작한 primer에 따라 다름. primer을 제작하는 program이나, 제작해 주는 회사에서 Tm값을 알려줌. 주로 55℃에서 60℃사이로 만들어지며 통상 30초에서 1분을 사용함.
4. Extension : 신장reaction 에 필요한 시간은 주형 DNA의 농도, 증폭단편의 크기, reaction 온도에 따라 좌우되지만 일반적으로 Taq polymerase를 사용할 경우 72℃에서 1kb이하는 1분, 그 보다 긴 경우는 1kb당 1분의 비율로 길게 설정. 즉, template가 3kb인 경우 3분으로 하겠죠..
5. 2번부터 4번과정을 25회에서 30회가량 반복.
6. End filling : 주형 DNA의 3`쪽의 충분한 Extension을 위해 72℃에서 10분간 실시.
8. 4℃에서 보관.
여기서 중요한 세 단계는 DNA denaturation, Annealing, Extension이다.
설명
다.
-Denaturation
DNA의 당인산 연결은 인산 에스테르 결합이라는 공유 결합으로 이루어져 있어 염기간의 결합인 하이드로젠 결합보다 강한 힘으로 결합이 되어 있다아 그러므로 적절한 열에 의해서 이중 가닥이 단일 가닥으로 변…(skip)
중합 효소 연쇄 반응(PCR)에 관한 자료입니다.
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PCR은 polymerase chain reaction의 약자로 한글로 풀어 얘기하자면 중합 효소 연쇄 reaction 이라 할 수 있겠다.
